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產(chǎn)品中心

當前位置:首頁產(chǎn)品中心實驗試劑酶類試劑EG15601SLightNing® ApaLI內(nèi)切酶

LightNing® ApaLI內(nèi)切酶
產(chǎn)品簡介:

LightNing® ApaLI內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing® 快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性,能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。

產(chǎn)品型號:EG15601S

更新時間:2025-05-14

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

訪問量:349

服務(wù)熱線

0512-62956104

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產(chǎn)品介紹

LightNing® ApaLI內(nèi)切酶組成

 

組分

規(guī)格

LightNing® ApaLI

200 μl

10× CutOne® Buffer

2×1 ml

10× CutOne® Color Buffer

2×1 ml

 


特性和用法

LightNing® ApaLI內(nèi)切酶,可在5~15 min內(nèi)完成反應(yīng)


u建議反應(yīng)條件

1× CutOne®緩沖液;

37℃溫育;

參照DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

u失活條件

80℃溫育20 min

u甲基化敏感性

對于被 CpG 甲基化的 DNA,剪切可能受阻,

對于被 EcoKI 甲基化的 DNA,剪切可能受阻。

u存儲條件

-20

 

相關(guān)問答

Q:為什么在CutOne® Buffer中加入HSA

A:一些酶在反應(yīng)過程中需要HSA的參與,我們在CutOne® Buffer中添加了HSA,避免反應(yīng)中額外添加組分,使得酶切反應(yīng)更加便捷

 

Q:HSA的添加對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能會產(chǎn)生什么樣的影響?

A:在我們的測試中未曾發(fā)現(xiàn)HSA對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能有任何影響。在有些情況下,對于部分的酶切反應(yīng)有促進作用。

 

Q:我需要嚴格遵守5~15 min的酶切時間嗎?能夠延長反應(yīng)時間嗎?

A:雷霆系列限制性內(nèi)切酶經(jīng)過改造可以將酶切時間縮短至5~15 min。同樣也消除了限制性內(nèi)切酶的星活性(長時間反應(yīng)造成的非特異性消化),在說明書中告知的星活性出現(xiàn)的時間范圍內(nèi)可以適當延長反應(yīng)時間。

 

Q:我什么時候應(yīng)當考慮星活性對于酶切反應(yīng)的影響?

A:如果額外的酶切條帶對于實驗結(jié)果會產(chǎn)生影響時我們應(yīng)當考慮星活性對于酶切反應(yīng)的影響。例如:進行基因型、突變型分析或克隆時我們應(yīng)當避免星活性的產(chǎn)生。避免星活性的有效方法:適當擴大反應(yīng)體積(較小的反應(yīng)體積容易造成甘油體積達到或超過總反應(yīng)體積的5%);不進行超長時間孵育(過夜消化極易產(chǎn)生星活性)。

 

Q:有哪些關(guān)鍵因素會導(dǎo)致星活性?

A:長時間孵育、過量的酶、高甘油含量(通常高于5%)、較小的反應(yīng)體系等因素都會導(dǎo)致星活性的產(chǎn)生。

 

 

Q:未經(jīng)純化的PCR產(chǎn)物直接酶切要怎樣設(shè)定體系?

A:反應(yīng)體系推薦由這些內(nèi)容組成:10 μl PCR產(chǎn)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer1~2 μl相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶、ddH2O補齊到30 μl。酶的用量根據(jù)PCR產(chǎn)物的濃度而定,只加入2 μl反應(yīng)緩沖液的原因是PCR反應(yīng)中存在對應(yīng)的鹽離子和金屬離子,適當減少反應(yīng)緩沖液的用量以保證最終反應(yīng)體系中的環(huán)境適宜限制性內(nèi)切酶發(fā)揮功能。

 

Q:限制性內(nèi)切酶簡并性識別位點一定是回文的嗎?

A:大多數(shù)二型限制性內(nèi)切酶的識別序列是回文的,而且是特定的堿基序列。然而有些限制性內(nèi)切酶具有簡并性識別位點,也就是說識別位點中有一個或以上的堿基對是非特異的(例如:BsrfI識別5RCCGGY, R=A/G, Y=C/T)。對于這樣的具有簡并性識別位點的限制性內(nèi)切酶,只要是符合要求的序列皆能被識別并且被正確地切割(例如5ACCGGC, 5ACCGGT, 5GCCGGC, 5GCCGGT,其中兩個并不是回文的,仍然能被BsrFI識別并且切割)。


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